HIV耐藥是導致艾滋病抗病毒治療失敗的重要原因之一。在2020版《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》繼續(xù)包含艾滋病耐藥檢測的內(nèi)容，關(guān)于艾滋病耐藥檢測我們要了解的哪些內(nèi)容呢？
什么是艾滋病耐藥？
也稱艾滋病病毒(HIV)耐藥，是指由HIV遺傳變異引起的、對抗病毒藥物抑制作用敏感性降低或不敏感的現(xiàn)象。
艾滋病耐藥從何而來？
(1)直接感染 當感染的毒株為HIV耐藥毒株時，即發(fā)生了原發(fā)性耐藥，也稱傳播性耐藥。
(2)藥物選擇 HIV是一種復制速度快且極易變異的病毒，在沒有抗病毒藥物時，HIV耐藥突變株會隨機出現(xiàn)，但沒有復制優(yōu)勢，不會在體內(nèi)積累；在抗病毒治療時，當藥物濃度不足時，HIV復制不能被完全抑制，HIV耐藥突變株的復制優(yōu)勢會顯現(xiàn)出來，繼而耐藥突變株逐漸積累增多，從而產(chǎn)生繼發(fā)性耐藥，也稱獲得性耐藥。
艾滋病耐藥如何檢測？
(1)基因型檢測 通過測序或基因芯片雜交等方法，檢測HIV基因組中是否有耐藥相關(guān)突變�；蛐蜋z測通常使用測序法，檢測流程如下：以HIV的基因組RNA為模板，逆轉(zhuǎn)錄PCR擴增目的基因片段，測序獲得HIV基因序列，與野生型序列進行比對，判斷是否有耐藥相關(guān)基因突變，再通過耐藥數(shù)據(jù)庫的算法關(guān)聯(lián)耐藥程度。樣本類型可為血漿和干血斑。測序方法通常采用Sanger測序法，隨著測序技術(shù)的發(fā)展，也逐漸開始使用深度測序法。
(2)表型檢測 又稱體外藥敏實驗，以50%抑制濃度(IC50)來表示，將待測毒株與野生型毒株的IC50比較，通過倍數(shù)改變(Fold change，F(xiàn)C)來評估耐藥程度。待測病毒可為直接從感染者體內(nèi)PBMC中分離培養(yǎng)的病毒，也可為含感染者HIV基因的重組病毒。
一般來說，基因型檢測的操作更簡單，而且檢測周期短，所以在臨床上使用得更多，但是表型檢測針對復雜突變和新型藥物的耐藥檢測更有優(yōu)勢。
基因型耐藥檢測結(jié)果如何看？
(1)耐藥突變的表示方法：耐藥突變是HIV基因核苷酸序列的變化，但采用氨基酸的變化來表示，格式如下：野毒株的氨基酸＋氨基酸的位置＋突變后的氨基酸，如K103N，是HIV逆轉(zhuǎn)錄酶的第103位氨基酸從賴氨酸(K)突變?yōu)樘於０?N)。
(2)耐藥解釋系統(tǒng)：指具有耐藥程度算法的數(shù)據(jù)庫，通過算法可將耐藥突變結(jié)果轉(zhuǎn)換為耐藥程度。例如，在應用較廣泛的Stanford HIVdb耐藥解釋系統(tǒng)中，K103N突變的耐藥程度為對奈韋拉平(NVP)和依非韋倫(EFV)高度耐藥。
HIV耐藥檢測的注意事項
(1)檢測時機：由于HIV極易突變，當耐藥患者停藥或中斷治療時，體內(nèi)沒有抗病毒藥物時，野生株的復制優(yōu)勢顯現(xiàn)并逐漸積累，最后將檢測不出耐藥，因此耐藥檢測的最佳時機為患者正在抗病毒治療時，或中斷治療一個月內(nèi)。
(2)警惕樣本間交叉污染，檢測過程中需要設(shè)置空白和陰性對照，并通過序列進化樹分析，排除交叉污染。
(3)未檢出耐藥突變時，不排除比例較低的耐藥毒株存在。這是因為當耐藥毒株在個體內(nèi)病毒準種中的比例低于10～20%時，利用Sanger測序法通常檢測不到其存在。
(艾防中心病毒及免疫研究室供稿)
